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DiO是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。进入细胞膜后，DiO在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，被激发后可以发出绿色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。可以用标准的FITC滤光片检测。

DiO通常不会明显影响细胞的生存力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

同义名	DiOC18(3);DiO perchlorate;3,3-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate
CAS号	34215-57-1
分子式	C53H85ClN2O6
分子量	881.72
外观	橘色至红色固体
光谱特性	Ex/Em=484/501nm
推荐滤光器	XF23-Omega,31001-Chroma
纯度	＞97%
溶解性	溶于DMF，DMSO，乙醇
结构式

• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  
• 染色固定的细胞或组织时，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛固定，使用其它不适当固定液会导致荧光背景较高。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 染色液制备
  
  • 配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～2mM。
    注：
    
    • 未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。
      
    • 发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。
      
    • 必须保证所用溶剂新鲜无水。
  • 工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5μM的工作液。
    注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。
• 悬浮细胞染色
  
  • 加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以2min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    
  • 孵育结束，按1000～1500rpm离心5min。
    
  • 倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
    
  • 重复步骤3和4两次以上。
• 贴壁细胞的染色
  
  • 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
    
  • 从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
    
  • 在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    
  • 吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
• 显微镜检测
  
  • DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参下表。
    

    产品名称	货号	分子量	Ex/Em	推荐滤光器
    DiO	SY0560	881.7	484/501nm	XF23-Omega,31001-Chroma
    DiI	SY0494	933.87	550/567nm	XF32-Omega,31002-Chroma
    DiD	SY0585	959.91	644/663nm	XF47-Omega,31023-Chroma
    DiR	SY0584	1013.4	748/780nm	XF112-Omega,41009-Chroma

  • 多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
    
    • DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
      
    • DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
      
    • DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005